抗体标记试剂盒 (Antibody Labeling Kits)

该试剂盒用于制备标记抗体，每个抗体具有2.5-3个标记。该试剂盒包含十个标记反应的所有试剂和材料，每个反应可标记100 ug 抗体。该染料是一种 NHS 酯，要控制使用量。它在弱碱性 pH 条件下与抗体上的赖氨酸氨基基团发生反应。抗体的纯化是通过使用硅胶离心柱来实现的。这些试剂盒包含磺化水溶性染料，最适合标记包括抗体在内的敏感蛋白。

试剂盒组分

试剂盒组分 数量
1321-10rxn
10 反应 		3321-10rxn
10 反应 		7321-10rxn
10 反应 		5321-10rxn
10 反应 		6321-10rxn
10 反应 		1821-10rxn
10 反应 		6821-10rxn
10 反应
N1320, sulfo-Cyanine3 NHS酯 (sulfo-Cyanine3 NHS ester), 1 rxn 10 — — — — — —
N3320, 磺基-Cyanine5 NHS 酯 (sulfo-Cyanine5 NHS ester), 1 rxn — 10 — — — — —
N7320, 磺基-Cyanine5.5 NHS酯 (sulfo-Cyanine5.5 NHS ester), 1 rxn — — 10 — — — —
N5320, 磺基-Cyanine7 NHS 酯 (sulfo-Cyanine7 NHS ester), 1 rxn — — — 10 — — —
N6320, 磺基-Cyanine7.5 NHS酯 (sulfo-Cyanine7.5 NHS ester), 1 rxn — — — — 10 — —
N1820, AF 488 NHS 酯 (AF 488 NHS ester), 1 rxn — — — — — 10 —
N2825, AF 594 NHS酯 (AF 594 NHS ester), 1 rxn — — — — — — 10
A1115, Desalting spin column, PBS, 1 pcs 10 10 10 10 10 10 10
脱盐容器瓶, 1.5mL 10 10 10 10 10 10 10
脱盐废液瓶，2 mL 10 10 10 10 10 10 10
PBS 片，适用于 100 mL 缓冲液 1 1 1 1 1 1 1
15050, DMSO (dimethyl sulfoxide), labeling grade, 1 mL 1 1 1 1 1 1 1
1584-05mL, Sodium azide solution, 3%, 0.5 mL 1 1 1 1 1 1 1
1689-15mL, Sodium bicarbonate, 126 mg 1 1 1 1 1 1 1

保质期 12 个月。

方法

1. 抗体制备

标记反应的最佳条件如下：抗体以1 mg/mL的浓度溶解在0.1 M碳酸氢钠溶液中。叠氮化钠与标记试剂兼容。如果抗体浓度低于1 mg/mL，则需浓缩。抗体制备应不含氨基酸、BSA 等蛋白质以及会使 pH 值处于（2-7.5 或 9-12）不利范围的缓冲液成分。

2. 设置反应

2.1. 将含抗体的碳酸氢钠溶液（100 ug/100 uL*）添加到荧光团中，涡旋，并在室温下孵育 30 分钟。如果要标记的抗体量较少，则将冻干染料溶解在10 uL无水DMSO中，每10 ug抗体取1 uL溶液。染料溶于DMSO后，应尽快使用。

3. 标记抗体的纯化

3.1.准备离心过滤柱。使用前，柱子应于室温平衡。使用涡旋重新悬浮凝胶。将柱子放入适配的无盖管中，以 1,000 g 离心 2 分钟（必须仔细控制转速对于标准 6 cm 转子，1,000 g = 3,800 rpm）。柱子的凸出部分应朝外。

3.2. 用 400 uL的 1x PBS 缓冲液润洗，以 1,000 g 离心 2 分钟。

3.3.取出柱子。将其放入带盖的收集管中。将 100 uL 反应混合物上柱，孵育 1 分钟， 1,000 g 离心 2 分钟洗脱抗体。添加 1/100 体积的 100x 叠氮化钠。抗体可以分装以延长其保质期。现用抗体可以储存在+4 °С，其余的可以储存在-20 °С。

4. 染料与抗体比值的测定

计算染料抗体比，测量偶联物的吸收光谱，即在280 nm (AAB) 或染料最大吸收峰 (ADye) 处的吸收值。染料标记抗体的典型吸收光谱如下图所示。根据染料的不同，最大吸收波长可能会有所不同。

标记抗体的吸收光谱包含染料峰（具有较长的波长）和抗体峰（280 nm 左右）。染料与抗体比使用以下公式计算：

其中 Dye/AB — 每个抗体分子的平均荧光团数，ADye — 样品在染料最大吸收处的光密度，AAB — 280 nm 处的样品光密度，εAB — 280 nm 处抗体的摩尔消光系数（IgG 为 210,000）， εDye — 染料在最大吸收时的摩尔消光系数（见下表），CF280 — 染料的校正因子（见下表）。<.p>

计算示例

用sulfo-Cyanine5标记IgG抗体并纯化后，得到吸收光谱如上图。确定染料与蛋白质的比例。

由吸收光谱可得，染料最大吸收值（646 nm，见表）时的ADye = 0.184， IgG的 AAB = 0.066（280 nm），εAB =210,000； ε染料 = 271,000，CF280 = 0.04。

染料/AB — 每个抗体有 2.43 个荧光团分子。

结果的判读和抗体储存

在大多数情况下，最佳染料与抗体比是每个抗体 2-3 个染料分子。由于荧光浓度猝灭，染料负载量增加到该值以上并不会改善荧光信号。当反应过程中附着的荧光团太少时，降低每次反应的抗体上样量。使用过期的试剂盒也会导致这种结果。

我们建议检测标记抗体与其抗原的结合。标记的抗体可保存在-20°С。当前使用的试样应储存在 +4 °С 下，以避免冻融循环。偶联物的稳定性由抗体本身决定，而不是由荧光团或化学键决定。标记的抗体不应长时间暴露在阳光直射下，但可耐受环境光照。

相关试剂盒

AF 594 抗体标记试剂盒 (AF 594 antibody labeling kit)

即用型试剂盒，使用 AF 594 染料通过NHS酯化学作用标记抗体和蛋白质。该试剂盒包含所有必需的化学品和消耗品。
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目录号 数量 价格 提前通知时间
6821-1rxn
1 rxn
$69 21 天
6821-10rxn
10 rxn
$450 21 天
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