
Реакционная смесь для кПЦР all-in-one, 2x (с добавлением dsGreen, ROX, UDG)
Смесь для кПЦР all-in-one подходит для точного определения содержания ДНК матрицы в пробе и может применяться для определения копийности и уровня экспрессии генов, генотипирования и др. Готовая 2-х кратная реакционная смесь содержит все необходимые компоненты для проведения количественной ПЦР, ее состав оптимизирован для получения идеальных результатов с минимальным значением порогового цикла и высоким уровнем отношения сигнал/фон. Смесь all-in-one - лучшее решение для большинства задач с минимальными затратами времени. Полимераза с технологией "горячего старта" предотвращает неспецифическую амплификацию, а урацил-ДНК-гликозилаза исключает кросс-контаминацию и получение ложноположительных результатов. Для детекции используется интеркалирующий краситель dsGreen в присутствии референсного красителя ROX* - оба реагента производства Lumiprobe и уже зарекомендовали себя на рынке флуоресцентных красителей. Концентрация ROX была специально оптимизирована для работы на большинстве real-time амплификаторов, доступных на рынке. Для постановки реакции просто смешайте в пробирке смесь для кПЦР all-in-one, праймеры, ДНК и воду; 1 мл реакционной смеси рассчитан на проведение 100 реакций объёмом 20 мкл.
Формат ПЦР: количественная ПЦР (ПЦР-РВ) с интеркалирующим красителем
Состав реакционной смеси: HS Taq ДНК-полимераза, смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов (включая dUTP), урацил-ДНК-гликозилаза (UDG), ПЦР-буфер (содержит Mg2+), интеркалирующий краситель dsGreen, референсный краситель ROX
Совместимость с оборудованием: совместим с большинством real-time амплификаторов, в том числе производства Applied Biosystems (7300, 7500, 7500 Fast, 7900HT, QuantStudio 12k Flex,QuantStudio 3, QuantStudio 5, QuantStudio 6 Flex, QuantStudio 7, StepOne, StepOnePlus, ViiA 7 System), Bio-Rad (CFX384, CFX 96, iQ5), Roche (LC 480), Stratagene (MX3000P, MX3005P, MX4000) и др.
Ключевые характеристики смеси:
- Для постановки реакции в смесь необходимо добавить только образец ДНК, праймеры и воду, что значительно экономит время на постановку реакции.
- Для анализа в режиме реального времени используется интеркалирующий флуоресцентный краситель dsGreen (Lumiprobe) в присутствии референсного красителя ROX.
- В состав смеси входят урацил-ДНК-гликозилаза (UDG) и dUTP для предотвращения кросс-контаминации продуктами реакции.**
- Подходит для ПЦР фрагментов длиной до 3 тыс. п.о., не более 70% GC, не требующих высокоточной амплификации.
- В качестве матрицы может использоваться геномная, вирусная, плазмидная ДНК и др.
- Формат готовой реакционной смеси снижает риск контаминации образцов.
- В состав реакционной смеси входит Taq-полимераза с технологией "горячего старта" (Hot Start). Используемая HS Taq ДНК-полимераза представляет собой комплекс моноклональных антител с ферментом. Прогрев образца в первом цикле ПЦР приводит к инактивации антител в составе комплекса и активирует фермент. Технология "горячего старта" позволяет предотвратить неспецифическую амплификацию и образование димеров праймеров.
- HS Taq ДНК-полимераза обладает 5'-3' полимеразной, 5'-3' экзонуклеазной, аденилтрансферазной активностью.
*мы также предлагаем готовую реакционную смесь для кПЦР, не содержащую ROX - All-in-one no ROX qPCR master mix.
**при полной замене dTTP на dUTP в реакционной смеси, все ПЦР-ампликоны содержат вместо тимина (Т) урацил (U). Урацил-ДНК-гликозилаза отщепляет основания урацила от сахарофосфатного остова одно- и двуцепочечной ДНК, но не воздействует на тимин-содержащую ДНК. Апиримидиновые сайты блокируют работу ДНК-полимеразы и подвержены гидролитическому расщеплению при повышенной температуре. Для работы фермента необходимо включить в протокол стадию предобработки образца в виде дополнительного цикла ПЦР (5 мин, 50 С). Последующая температурная инактивация урацил-ДНК-гликозилазы, а также разрушение ампликонов с выщепленным урацилом осуществляется на стадии предварительной денатурации ДНК.
Таблица подбора мастер микса для ПЦР
Реакционные смеси для количественной ПЦР (ПЦР-РВ) | ||||
---|---|---|---|---|
Название смеси | dsGreen | ROX | UDG, dUTP | Применение |
ProbeMaster ROX+UDG qPCR mix Cat.# •5214 | — | ✔ | ✔ | кПЦР с ДНК-зондами или интеркалирующим красителем |
ProbeMaster ROX qPCR mix Cat.# •5114 | — | ✔ | — | |
ProbeMaster dsGreen+ROX qPCR mix Cat.# •5514 | ✔ | ✔ | — | кПЦР с интеркалирующим красителем |
All-in-one qPCR master mix Cat.# •5414 | ✔ | ✔ | ✔ | |
All-in-one no ROX qPCR master mix Cat.# •5314 | ✔ | — | ✔ | |
Реакционная смесь для стандартной ПЦР | ||||
Basic PCR master mix Cat.# •5024 | — | — | — | ПЦР с последующим анализом методом гель-электрофореза, содержит краситель для нанесения на гель |
Универсальная реакционная смесь | ||||
PCR/qPCR master mix Cat.# •5534 | — | — | — | кПЦР с ДНК-зондами/интеркалирующим красителем или стандартная ПЦР с последующим анализом методом гель-электрофореза |
顾客还购买了这个产品
dsSafe Nucleic Acid Gel Staining Solution, 10,000×
Fluorescent dye for DNA and RNA gel visualization, the best and safer alternative to ethidium bromide.sulfo-Cyanine5 dUTP
sulfo-Cyanine5 dUTP is a fluorescently labeled triphosphate used to enzymatically modify DNA with a sulfo-Cyanine5 fluorophore. The reagent contains a long linker arm, which makes incorporation highly efficient.并获得免费的快递服务
PreciseGreen® dsDNA 定量试剂,200× (PreciseGreen dsDNA Quantification Reagent, 200×)
PreciseGreen® 是一种染料,可用于在RNA、ssDNA 和其他杂质存在的情况下对dsDNA进行精确荧光定量。该染料在荧光素通道中表现出明亮的荧光,在pg/mLng/mL 范围内对 DNA 浓度提供线性响应。