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FAM-dT亚磷酰胺

这种亚磷酰胺允许在亚磷酰胺方法合成过程中将荧光素 (FAM) 引入寡核苷酸序列中的任何位置（在链的中间，在 5'- 和 3'- 末端）。该试剂是脱氧胸苷亚磷酰胺和 FAM 6-异构体的结合物。在寡核苷酸合成过程中通过用荧光素-dT 亚磷酰胺取代标准 dT 亚磷酰胺进行修饰。这种修饰不影响核酸外切酶或聚合酶活性。 如需在 5' 末端用荧光素进行修饰，请使用 FAM 亚磷酰胺，6-异构体。 用法 耦合：10分钟 脱保护：标准条件下使用氢氧化铵；脱保护时间取决于寡核苷酸组成和核碱基保护基团（在 55 °С 下脱保护 17 小时可去除标准核碱基上的所有保护基团）。用AMA（30% 氢氧化铵/40% 甲胺水溶液 1:1 v/v 的溶液）可形成约 5% 的非荧光副产物。为了避免副产物的形成，开始用氢氧化铵脱保护（室温下30 分钟），然后添加等体积的 40% 甲胺水溶液，继续用AMA 按要求脱保护（例如 65 °C 下 10 分钟）。