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Hoechst 33258，蓝色荧光核酸染色剂 (Hoechst 33258, blue fluorescent nucleic acid stain)

Hoechst 33258（双苯甲亚胺，HOE 33258）是一种细胞可渗透的蓝色荧光染料，可与双链 DNA 小沟中富含腺嘌呤-胸腺嘧啶的区域强烈结合。尽管 Hoechst 33258 可以结合所有核酸，但富含 AT 的 dsDNA 链可显著增强其荧光。

与 DNA 结合的 Hoechst 33258 的激发/发射最大值分别为 351/463 nm。Hoechst 33258 的荧光强度随着溶剂 pH 值的增加而增加。未结合的染料在 510–540 nm 范围内发出荧光。当使用的染料浓度过高或样品未充分冲洗时，可能会观察到未结合染料的绿色荧光。该染料在激发光谱和发射光谱之间具有相当大的斯托克斯位移，使其在多色标记实验中具有应用价值。

Hoechst 33258 能够穿透活细胞，但其细胞渗透性比 Hoechst 33342 低 10 倍。与所有 Hoechst 系列染料一样，Hoechst 33258 的毒性低于 DAPI，从而确保染色细胞具有更高的活力。

Hoechst 33258 广泛用于荧光显微镜和流式细胞术，对活细胞和固定细胞中的染色体和细胞核进行染色。该染料常用于区分凋亡细胞中的浓缩固缩核和细胞分选。

Hoechst 33258 可被溴脱氧尿苷bromodeoxyuridine (BrdU)淬灭，常用于检测分裂细胞。当 BrdU 整合到 DNA 中时，溴会使小沟变形，从而使Hoechst 染料无法到达其最佳结合位点。 Hoechst 33258 的这一特性用于研究细胞周期进展。

细菌或真核细胞染色常用的染料浓度为 0.1–10 μg/mL。